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          氣相色譜儀-液相色譜儀廠家-南京科捷分析儀器有限公司

          高效液相色譜中常用的柱前衍生化方法

          紫外衍生化反應

            液相色譜使用最多的是紫外檢測器,為了使一些沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測器檢測,往往通過衍生化反應在這些化合物的分子中引入有強紫外吸收的基團:2,4-二硝基苯、苯甲基、對硝基苯甲基、3,5-二硝基苯甲基、苯甲酸酯、對甲苯酰、對氯苯甲酸制、對硝基苯甲酸酯、對甲氧基苯甲酸酯、苯甲酰甲基、對溴苯甲酰甲基,這些衍生物可被紫外檢測器檢測。
            大多數紫外衍生反應來自經典的光度分析和有機定量分析,新的衍生化反應和衍生化試劑是隨液相發展而發展的,這些反應的原理都來自有機合成,所以就要求操作者對有機合成有所了解。但是,由于柱前衍生化是為色譜分析準備樣品,處理樣品的量?。╩g級),所用的小型和微型反應器皿又不同于常量的有機合成,而是類似于近年來發展的微量有機合成。紫外衍生化反應要選擇反應產率高、重復性好的反應。過量試劑和試劑中的雜質如果干擾下一步的色譜分離和檢測,則在色譜進樣前要進行純化分離。還要注意反應介質對紫外吸收的影響。
            (1)苯甲?;磻罕郊柞B燃捌溲苌?-對硝基苯甲酰氯、3,5-二甲基苯甲酰氯和對甲氧基苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚類化合物反應,生成紫外吸收的苯甲酸酯類衍生物;
            (2)2,4-二硝基氟代苯(DNFB)的反應:DNFB與醇的反應產率很低,但可與大多數伯胺、仲胺和氨基酸反應,生成強紫外吸收的苯胺類衍生物;
            (3)苯基異硫氰酸酯(PITC)的反應:PITC可與氨基酸反應,生成苯基己丙酰硫脲衍生物--PTH氨基酸;
            (4)苯基磺酰氯的反應:苯基磺酰氯可與伯胺和仲胺反應。
            甲苯磺酰氯可與多氨基化合物反應,不僅能提高它們的檢測靈敏度,還可改變HPLC的分離度。
            (5)有機酸的酯化反應:有機酸很容易與酰溴基反應生成酯,常用的酰溴基試劑有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰溴、對溴基苯甲酰溴和對硝基苯甲酰溴等;
            酯化反應在極性溶劑(如乙腈、丙酮或四氫呋喃)中進行,有時需要加催化劑,如冠醚加鉀離子、二乙胺或N-二異丙基胺等。
            (6)羰羥基化合物的反應:醛類和酮類中的羰基可與2,4-二硝基苯肼(DNPA)反應,反應在弱酸性條件下進行,生成苯腙衍生物。
            羰基化合物還可以與對甲基芐基羥胺(PNBA)在堿催化下反應,生成有強紫外吸收的肟。


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