在 ELISA 實驗所需的簡單儀器中，搖床是個迷惑的存在，科研猿們經常在是否需要使用中舉棋不定。大多數的 ELISA 實驗是不需要使用搖床的，室溫孵育即可，但有些特殊的 ELISA 不但需要搖床，且有嚴格的使用參數。

在 R&D Systems® ELISA 試劑盒說明書中，其實早有答案，以 Human IL-6 Quantikine HS ELISA Kit（貨號 HS600C）為例，操作流程（Assay procedure）部分中提到：

這里，建議使用 500 rpm，0.12" orbit 參數的搖床/振蕩器。

• 搖床長什么樣？為什么需要使用搖床？

眾所周知，實驗室里通常有各種用途及規格的搖床，如用來培養細菌、動物細胞及用于 Western Blot 抗體孵育的搖床等。

我們 ELISA 說明書中要求的搖床類似下圖，該搖床專為 96 孔板設計，軌道直徑 3 mm，轉速可達到 500±50 rpm，運行時快速振動，且頂部托盤有微孔板固定裝置，微孔板既不會松脫，也不會有液體飛濺。

如果在 ELISA 產品說明書中要求使用搖床，則必須使用，否則會影響抗原抗體的有效結合，導致待測孔的 OD 值偏低。

例如使用 Human/Mouse/Rat Activin A Quantikine ELISA Kit（貨號 DAC00B），在未使用搖床時得到的標準品 OD 值（450 nm 的測定值減去 570 nm 的測定值）異常（表 1）。

結果顯示，最高濃度（1,000 pg/mL）的標準品平均 OD 值僅為 0.647，且 125pg/mL 標準品兩個復孔 OD 值相差較大，低濃度標準品 OD 值無明顯梯度。因而無法保證檢測結果的準確性。而在使用了搖床的實驗中，標準品 OD 值正常（表 2）。

• 是否必須使用指定參數的搖床？可以用其它規格代替嗎？

由于說明書中指定的軌道直徑 3 mm，轉速 500±50 rpm 的搖床是我們驗證過的能保證準確結果的搖床，而其它搖床，如 Western Blot 實驗中使用的水平搖床軌道直徑較大，如果設置成 500rpm 就會轉速太快，容易造成微孔板內液體飛濺、樣品孔污染，進而影響實驗結果的準確性。

如果您希望使用其它規格的搖床嘗試，可進行如下操作：

將適量體積的液體加入備用 96 孔微孔板，用封口膜覆蓋孔板；

調整搖床速度，讓液體劇烈振蕩，使其幾乎旋轉到微孔板的頂部，但不能形成氣泡或飛濺到封板膜上；

使用 R&D Systems® 的試劑盒做一次標準曲線，驗證一下實驗結果是否可以接受。

但這種測試需要耗費額外的孔板及時間，得不償失，所以最好還是根據說明書的建議選擇搖床。

小小的搖床，卻關乎實驗的成敗。當我們準備開展實驗時，不妨多研讀一番說明書，不要錯過其中的細枝末節。

以上文字和圖片來源于Bio-techne